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硫酸亚铁对溃疡性结肠炎模型大鼠氧化应激状态的影响

                 作者:张道权,吴正祥,吴强 ,杨枫,吴正升

【摘要】  目的 考察口服硫酸亚铁(FeSO4 )对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠氧化应激状态 的影响。方法 采用TNBS乙醇溶液复制UC大鼠模型,雄性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为正常对照组、模型对照组、FeSO 4对照组(100 mg·kg-1·d-1)和FeSO4 低剂量组(50 mg ·kg-1·d-1)、中剂量组(100 mg · kg-1·d-1 )和高剂量组(300 mg · kg -1·d-1),给药2周后分别观察大鼠的一般状态、组织病理学变化、组织及血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)水平。 结果 FeSO4 中、高剂量组大鼠体质量减轻,腹泻动物数增加,结肠组织损伤加重,血清与结肠组织SOD活性降低、MDA水平升高(P<0.05)。结论 UC模型大鼠体内存在氧化应激,口服补充FeSO4 可能会进一步加剧其体内氧化应激状态及结肠组织病理学损伤。

【关键词】  硫酸亚铁;溃疡性结肠炎;三硝基苯磺酸;氧化应激;大鼠

  溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因  不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症,临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便,重症或病情持  续活动的患者可出现缺铁性贫血。临床观察发现,给予UC患者口服铁剂不能很好地被耐受,甚至会加重  胃肠道症状或促进疾病活动[1]。硫酸亚铁(ferrous   sulfate,FeSO 4 )是临床最为常用的铁剂之一,同时也是一种强氧化剂,可能会因产生自由基(oxygen-derived   free radicals,OFR)而加重组织损伤[2]。本实验利用三  硝基苯磺酸(2,4,6- trinitrobenzene sulfonic acid,TN-  BS)复制UC模型,观察FeSO4对UC模型大鼠氧化应激状态的影响,为临床治疗提供依据。

  1 材料和方法   

  1.1 药物和试剂 

  TNBS购于Sigma公司,5%(W/V)水溶液,批号为P2297;FeSO4,上海黄浦制药有限责任公司生产,批号为050606,轻轻把FeSO4片研碎,称取一定量的粉末,加入蒸馏水配成100 mg · ml    -1的混悬液备用;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、考马斯亮兰蛋白  检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品,批号为20060323。   

  1.2 动物 

  雄性SD大鼠60只,体质量200~220 g,由安徽医科大学实验动物中心提供,普通级。  

  1.3 仪器 

  756MC紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限  公司),TGL-16H高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司),可控式硅恒温水浴锅(上海锦屏仪器仪表有限公司),QL-901漩涡混合器(江苏海门麒麟医用仪表厂),电子分析天平(上海天平仪器厂),DIAX-900内切式组织匀浆机(德国Heidolph公司)。

   1.4 大鼠UC模型制备[3]

  健康大鼠60只,随机分为6组。留2组作正常对照组与FeSO    4 对照组,余4组均制备模型,禁食不禁水24 h后,腹腔注射3%戊巴比妥钠(1 ml·kg-1)使大鼠轻微麻醉后,将直径2 mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约8 cm处,将TNBS(125 mg·kg    -1)的50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内,提起大鼠尾部,倒置30 s,使造模剂充分渗入大鼠肠腔。  

  1.5 分组及给药 

  将正常大鼠随机分为正常对照组与FeSO4对照组,每组10只;将造模大鼠随机分为模型对照组,Fe-SO4给药高、中、低剂量组,每组10只。FeSO4对照组大鼠,按照100 mg · kg-1·d-1    灌胃FeSO4混悬液;Fe-SO4高、中、低剂量组大鼠,分别按照300 mg·kg-1·d-1  、100 mg ·kg-1· d-1、50 mg·kg-1· d    -1灌胃FeSO4混悬液;正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水,各组大鼠均在造模后6 h开始给药,连续给药2周。  

  1.6 症状观察 

  每天对各组大鼠进行称重,观察体质量变化并记录;观察大鼠粪便形状,记录大鼠发生腹泻、血便的数量。  

  1.7 结肠黏膜组织损伤评分 

  各组大鼠给药2周后,3%戊巴比妥钠过量麻醉,腹主动脉取血2 ml,离心后置-80 ℃冰箱保存备用。将肛门以上10 cm肠段取出,沿肠系膜纵行切开,用冰生理盐水冲洗,并称量。将黏膜向上展开,观察黏膜损伤并按照Wallace和Keenan1990年的评分标准[4]进行评分:0分为无炎症和溃疡;1分为局部充血但无溃疡;2分为有溃疡但无充血;3分为有1处溃疡及炎症; 4分为有2处或2处以上溃疡及炎症;5分为溃疡延伸超过2 cm。同时取少量炎症肠组织,迅速放置液氮罐中备用。  

  1.8 病理组织切片观察 

  取肛门以上8 cm肠段卷起,置10%中性甲醛液中固定,石蜡包埋,行4μm厚连续切片,HE染色观察组织学变化。  

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