祖卡木颗粒剂的除杂工艺研究



                作者:徐芳, 黄毅, 闫明, 马建玲, 王新堂, 仲婕

   【关键词】  祖卡木颗粒

  摘要:目的优选出祖卡木颗粒剂的除杂工艺。方法以总黄酮、总蒽醌、甘草酸的保留率及固形物减少率为考察指标比较不同除杂工艺―超滤法、吸附澄清法、高速离心法、醇沉法及自然沉降法的效果。结果采用高速离心法进行除杂,有效成分保留最多。结论在对比的几种除杂方法中,采用高速离心法有效成分保留最多,而且操作简单,省时。

  关键词:祖卡木颗粒剂;超滤法;吸附澄清法;高速离心法;醇沉法

  Studies on the Purification Technology of Zukamu Granules

  Abstract:ObjectiveTo select the optimum purified technology of Zukamu granules.MethodsThe purification conditions were optimized by content determination of total flavones,total anthraquinone,glycyrrhizic acid and the yield of dried extract comparing ultrafiltration method with absorbingclarifying method,ultracentrifugation method and alcoholprecipitation method. ResultsAll figures treated by ultracentrifugation method were the highest among the purified technologies.ConclusionThe ultracentrifugation method is the best because of high contentpreserved,simple operation and saving time.

  Key words: Zukamu Granules;Ultrafiltration method;Absorbingclarifying method;Ultracentrifugation method; Alcoholprecipitation method

  祖卡木颗粒剂是由山萘、睡莲花、大枣、大黄、甘草等药材提取制成,具有调节异常气质、清热、发汗、通窍之功效,用于感冒咳嗽、发热无汗、咽喉肿痛、鼻塞流涕等病症,疗效显著[1]。由于本品原工艺采用醇沉法除杂,需耗费大量乙醇和时间,为降低成本,需要寻找一个操作简便、成本小、省时的除杂方法,同时又能保证药物疗效。本研究比较了超滤法、吸附澄清法、高速离心法、醇沉法、自然沉降法等几种除杂方法的效果,优选出了祖卡木颗粒剂最佳的除杂方法。

   1 仪器与材料

  1.1仪器 UF80实验型膜分离(超滤)装置,中空纤维膜组件(分子量截流值分别为1万、3万、5万,膜材均为聚砜,天津膜天膜工程技术有限公司);GQ76高速管式分离机(上海市离心机械研究所);岛津LC10ATvp高效液相色谱仪,SPD10Avp紫外可见检测器,CLASSvp6.0数据工作站(日本岛津);UV2501PC紫外可见分光光度计(日本岛津); BS110S型电子天平(德国Sartorius)。

  1.2 材料

  药材由新疆维吾尔药业有限责任公司提供;芦丁、甘草酸单胺盐、1,8二羟基蒽醌对照品均由中国药品生物制品检定所提供;壳聚糖由华东理工大学理学院华凯科技贸易公司提供;乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

   2 方法与结果

  2.1 考察指标的确定[2]除杂目的是降低出膏率,即增加固形物减少率,并且最大程度地保留有效成分,所以将固形物减少率作为考察指标之一,权重系数定为0.1。因为本制剂为抗感冒制剂,处方中多数药材都含有黄酮类成分,而黄酮类成分具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用,故将其成分保留率作为考察指标,权重系数定为0.6;大黄为方中主药之一,含蒽醌类衍生物,具有抗菌、抗病毒、抗炎作用,故将其成分保留率作为考察指标,权重系数定为0.2;甘草中所含的甘草酸具有抗炎、镇咳祛痰及免疫增强作用,故将其成分保留率作为考察指标,权重系数定为0.1。本研究用成分保留率来表示不同除杂工艺对总黄酮、总蒽醌、甘草酸含量的影响,计算公式如下:

  2.2考察指标的测定方法

  2.2.1  总黄酮的测定方法[3]采用分光光度法测定总黄酮,即芦丁对照品分别加5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠溶液显色,于510 nm波长处测定吸收值,得回归方程为:C(mg)=0.013 61+0.893 6A,r=0.999 8,在0.104 5~1.044 5 mg浓度范围内呈良好线性关系。精密量取一定量样品溶液,同法操作,在510 nm处测定吸收值,代入回归方程,计算含量。

  2.2.2 总蒽醌的测定方法[4]采用分光光度法测定总蒽醌,即1,8二羟基蒽醌对照品分别加0.5%醋酸镁甲醇溶液显色,于510 nm波长处测定吸收值,得回归方程为:C(μg)=-5.841 7+239.314 4 A,r=0.998 1,在47.232~283.392 μg浓度范围内呈良好线性关系。样品溶液加0.5 ml浓盐酸和30 ml氯仿,加热回流1 h,放冷,分取氯仿层,水层再用氯仿提取3次(20 ml/次)。合并氯仿层,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml容量瓶中,并用甲醇稀释至刻度。取此样品溶液同法操作,在510 nm处测定吸收值,代入回归方程,计算含量。

  2.2.3 甘草酸的测定方法[5]色谱条件: 色谱柱为Shimpack CLCODS柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相为乙腈2%乙酸溶液(40∶60);流速1 ml/min;检测波长254 nm;柱温30℃。

  标准曲线制备:取甘草酸单胺盐对照品约10 mg,精密称定,置100 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精密量取一定体积用甲醇配成系列浓度溶液。精密吸取各溶液10μl注入高效液相色谱仪,以甘草酸的峰面积A与甘草酸单胺盐的浓度C作直线回归,得回归方程为:C(μg/ml)=-5.952 4+1.397 0×10-4A,r=0.999 2,在13.52~270.40 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。

  供试品溶液制备及测定:精密量取一定量的样品溶液置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,静置24 h,离心,取上清液用0.45μm滤膜过滤。取续滤液10μl注入高效液相色谱仪,将测得的峰面积代入回归方程,计算含量。

  阴性对照溶液的制备及测定:按处方比例,取除去甘草的其它药味,制成模拟空白样品。按前述方法操作,结果在甘草酸的出峰位置处无其它干扰。

  2.2.4 出膏率及固形物减少率测定[2]精密量取一定体积的样品溶液,置于已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于真空干燥箱中减压干燥至恒重,在干燥器中冷却30 min,迅速称重,计算出膏率及固形物减少率。